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微生物檢測(cè)中菌懸液不會(huì)制備,化驗(yàn)結(jié)果怎么能保證準(zhǔn)確?

來(lái)源:弗戈工業(yè)在線(xiàn)2023-05-10 09:54:18

一、操作流程

這里以大家最常用的大腸埃希菌為例,其它菌種方法類(lèi)似。


(資料圖片)

1,菌種制備:從菌種保藏管中吸取少量菌液,轉(zhuǎn)接到新鮮的TSB中,于30℃-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)。

2,稀釋?zhuān)?/strong>取步驟1的培養(yǎng)物1mL,加入到9mL的pH7.0氯化鈉蛋白質(zhì)緩沖液中,進(jìn)行倍比稀釋。

3,平板計(jì)數(shù):取稀釋好的菌液,一般取3個(gè)稀釋級(jí),每個(gè)梯度取2mL,分別加入兩塊90cm的平皿中,每皿加入1mL菌液,傾注45℃左右的已經(jīng)經(jīng)過(guò)確定的TSA培養(yǎng)基,輕輕搖勻,靜置,培養(yǎng)基凝固后,置30-35℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)。

4,菌落計(jì)數(shù):將培養(yǎng)后的平板,置于菌落計(jì)數(shù)器下進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),以確定哪個(gè)稀釋級(jí)的濃度能夠滿(mǎn)足測(cè)試的要求。

二、對(duì)應(yīng)注意事項(xiàng)

1,菌種制備:也可以使用TSA平板進(jìn)行培養(yǎng),如果轉(zhuǎn)接的是冷凍保藏管中的菌,最好再轉(zhuǎn)接一次,使用第二次轉(zhuǎn)接的菌種。

2,稀釋?zhuān)?/strong>取菌液的時(shí)候,需要先對(duì)菌液進(jìn)行振蕩或吹打混勻,方可吸取菌液。可以不用進(jìn)行倍比稀釋?zhuān)灰鼙WC最后加入到測(cè)試樣品中的菌的數(shù)量符合要求即可。

3,平板計(jì)數(shù):取菌液時(shí)同樣需要先將試管中的菌液進(jìn)行混勻。

4,培養(yǎng)基菌落計(jì)數(shù):不建議逐日觀察結(jié)果,因?yàn)槠桨逯锌赡苡心?逐日觀察拿動(dòng)平板,可能會(huì)導(dǎo)致水落到菌落上,菌跟著水流到下一個(gè)空白地方,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確;另外如果是霉菌,因?yàn)橛墟咦?,拿?dòng)也會(huì)導(dǎo)致孢子落到平板空白地方,影響結(jié)果。

三、事后思考

1、菌液的作用

菌懸液使用有時(shí)效性要求:

2020版《中國(guó)藥典》和《歐洲藥典》8.0版要求如果放置在室溫,菌懸液必須在2小時(shí)內(nèi)使用,如果放置在2-8℃保存,可以在24小時(shí)內(nèi)使用。

那么問(wèn)題來(lái)了,菌懸液的菌的數(shù)量需要在48小時(shí)后才能確定,但是在24小時(shí)之內(nèi)菌懸液必須使用,所以在不知道菌含量的情況下,樣品測(cè)試需要做至少三個(gè)梯度。

筆者之前在微生物實(shí)驗(yàn)室做了5次的菌懸液制備,為了保證實(shí)驗(yàn)的成功,每次都是要做三個(gè)梯度,雖然大多數(shù)都是同一個(gè)稀釋級(jí)的含量符合要求,但是還是偶爾有另一個(gè)稀釋級(jí)才符合要求的時(shí)候,所以筆者每次都乖乖的做三個(gè)梯度的測(cè)試,還好筆者那個(gè)時(shí)候依據(jù)的法規(guī)中,日常的無(wú)菌檢查和控制菌檢查中沒(méi)有陽(yáng)性對(duì)照的要求。

這里說(shuō)的三個(gè)梯度不是說(shuō)只是計(jì)數(shù),而是菌懸液實(shí)際運(yùn)用的測(cè)試中也需要三個(gè)梯度,舉個(gè)例子,某個(gè)無(wú)菌產(chǎn)品無(wú)菌檢查中的陽(yáng)性對(duì)照測(cè)試,需要做三個(gè)對(duì)照。當(dāng)然,同樣的產(chǎn)品方法適用性,培養(yǎng)基促生長(zhǎng)測(cè)試也是如此。流程圖如下:

2、步驟的繁瑣

這個(gè)流程圖中,還是省略了一些步驟,一句話(huà)帶過(guò)的倍比稀釋?zhuān)鲞^(guò)的小伙伴們知道,這個(gè)說(shuō)起來(lái)容易做起來(lái)難。

另外在接收菌種和從冷凍保藏管中取出菌種來(lái)使用時(shí),還需要進(jìn)行相應(yīng)的鑒定,所以不要覺(jué)得這個(gè)流程好冗長(zhǎng),其實(shí)已經(jīng)是簡(jiǎn)單版的。

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